目的：探討葛根素聯(lián)合銀-羥基磷灰石（Ag-HA）涂層植入對種植體周圍炎大鼠的炎癥水平、骨礦物質(zhì)密度及骨生物學參數(shù)的影響。通過比較不同治療組的臨床表現(xiàn)、炎癥因子水平、基因和蛋白表達及骨密度指標為種植體周圍炎的治療提供新的思路和實驗依據(jù)。
方法：選取雄性大鼠50只為研究對象復制牙周炎模型。模型復制成功后將牙周炎模型大鼠隨機分為牙周炎組10只、Ag-HA組20只、聯(lián)合組20只。牙周炎組大鼠不接受干預，Ag-HA組大鼠接受Ag-HA涂層種植體治療，聯(lián)合組大鼠接受葛根素聯(lián)合Ag-HA涂層種植體治療。檢測并比較術(shù)前及術(shù)后1、2、4、8周大鼠齦溝出血指數(shù)、牙齦指數(shù)、探診深度、血清炎癥因子水平、骨結(jié)合能力。收集3組大鼠術(shù)后8周牙周組織，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測相關(guān)mRNA的表達，Western blotting檢測相關(guān)蛋白的表達。對大鼠模
型進行micro CT三維重建后統(tǒng)計并比較骨生物學參數(shù)。
結(jié)果：牙周炎組、Ag-HA組、聯(lián)合組術(shù)前及術(shù)后1、2、4、8周的齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度、人腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、人白細胞介素-6（IL-6）、人白細胞介素-1β（IL-1β）、堿性磷酸酶（ALP）、骨結(jié)合率比較，結(jié)果：①不同時間點齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度、TNF-α、IL-6、IL-1β、ALP、骨結(jié)合率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05）；②牙周炎組、Ag-HA組、聯(lián)合組齦溝出血指、牙齦指數(shù)、
探診深度、TNF-α、IL-6、IL-1β、ALP、骨結(jié)合率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05），聯(lián)合組齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度、TNF-α、IL-6、IL-1β水平較低，ALP、骨結(jié)合能力較高，相對治療效果較好；③3組齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度、TNF-α、IL-6、IL-1β、骨結(jié)合率變化趨勢比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05）；3組骨ALP變化趨勢比較，差異無統(tǒng)計學意義（P >0.05）。聯(lián)合組大鼠牙周組織IL-1β、CXCL12、CXCR4 mRNA和蛋白相對表達量均低于Ag-HA組（P <0.05），OPG mRNA和蛋白相對表達量均高于Ag-HA組（P <0.05）。聯(lián)合組大鼠組織礦物質(zhì)密度、骨體積分數(shù)、骨小梁厚度均高于Ag-HA組（P <0.05），聯(lián)合組大鼠骨礦物質(zhì)密度、上頜第一磨牙釉牙骨質(zhì)界至牙槽嵴頂?shù)木嚯x均低于Ag-HA組（P <0.05）。
結(jié)論：葛根素聯(lián)合Ag-HA涂層植入能顯著改善種植體周圍炎大鼠的炎癥水平、牙齦指數(shù)、探診深度及骨結(jié)合能力。聯(lián)合治療較單獨治療在抑制炎癥反應、提高骨密度及改善牙周組織修復方面效果更顯著。特別是在OPG蛋白表達和骨生物學參數(shù)方面，聯(lián)合治療表現(xiàn)出較高的優(yōu)勢，提示其在種植體周圍炎治療中的潛在應用價值。
關(guān)鍵詞 ：種植體周圍炎；牙周炎；葛根素；銀-羥基磷灰石；大鼠；炎癥因子；骨生物學參數(shù)
中圖分類號 ：R783.6
文獻標識碼 ：A
DOI: 10.3969/j.issn.1005-8982.2025.18.006
文章編號：1005-8982 （2025） 18-0032-10
來源：中國知網(wǎng)
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種植體周圍炎是口腔種植修復后常見的并發(fā)癥，病理特征包括種植體周圍軟硬組織炎癥、骨吸收及微生物生物膜形成，嚴重時可導致種植體失敗。流行病學研究表明，種植體周圍炎的發(fā)病率高達28%～56%，且與吸煙、糖尿病及口腔衛(wèi)生不良等因素密切相關(guān)[1]。目前臨床治療多依賴機械清創(chuàng)、抗生素應用及局部抗炎藥物，但存在療效有限、易復發(fā)及耐藥性等問題。因此，開發(fā)兼具抗菌、抗炎及骨再生協(xié)同作用的治療策略具有重要臨床意義。銀-羥基磷灰石（Ag-hydroxyapatite，Ag-HA） 涂層作為一種新型骨植入材料，通過釋放銀離子Ag＋抑制細菌生物膜形成，并通過羥基磷灰石（silver-hydroxyapatite, HA） 的骨傳導性促進骨結(jié)合，在骨科及牙科領域展現(xiàn)出應用潛力。研究表明，Ag-HA 涂層可顯著降低種植體周圍金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的黏附密度，減輕炎癥反應[2]。然而，其對宿主免疫微環(huán)境的調(diào)控作用及長期骨再生效能仍需進一步驗證。葛根素是從豆科植物葛根中提取的異黃酮類化合物， 具有抗炎、抗氧化及免疫調(diào)節(jié)特性。其作用機制涉及抑制核因子κB （nuclear factor- κB, NF- κB）、絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）及信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducers and activators of transcription, STAT） 信號通路，減少促炎因子釋放，并促進調(diào)節(jié)性T 細胞分化。動物實驗結(jié)果顯示， 葛根素可通過調(diào)控白細胞介素-23（Interleukin-23, IL-23） /輔助性T 細胞17 （T helper cell 17, Th17） 軸抑制破骨細胞活性，改善牙槽骨吸收， 并促進成骨細胞分化及骨礦物質(zhì)沉積[3-4]。此外，葛根素與納米材料聯(lián)合應用可增強生物利用度及靶向性，提示其在骨組織工程中的潛在協(xié)同價值。盡管Ag-HA 涂層和葛根素在抗炎及骨修復方面均表現(xiàn)出一定優(yōu)勢，但目前尚無研究探討兩者聯(lián)合應用對種植體周圍炎的綜合調(diào)控作用。本研究通過構(gòu)建大鼠種植體周圍炎模型，系統(tǒng)評估葛根素聯(lián)合Ag-HA 涂層植入對炎癥因子表達、骨代謝標志物及骨微結(jié)構(gòu)的影響，旨在揭示多靶點聯(lián)合干預的協(xié)同機制，為臨床優(yōu)化種植體周圍炎治療方案提供實驗依據(jù)。 
50只SPF級雄性Sprague-Dawley大鼠[實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK （京） 2022-0012]，由斯貝福（北京） 生物技術(shù)有限公司提供。實驗在康復大學青島中心醫(yī)院SPF 級動物實驗中心完成[實驗動物使用許可證號：SYXK （魯） 2022-0053]，所有操作遵循《實驗動物護理與使用指南》，并經(jīng)康復大學實驗動物倫理委員會批準。大鼠5～8 周，體重225～255 g。大鼠在穩(wěn)定環(huán)境常規(guī)飼養(yǎng)1 周后進行實驗，溫度22～25 ℃，相對濕度40%～60%。 
HA粉末（瑞士Sulzer Metco公司，粒徑15～50 μm），人腫瘤壞死因子- α （tumor necrosis factor, TNF- α）酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA） 試劑盒（上海酶聯(lián)生物科技有限公司），人白細胞介素-6 （Interleukin-6, IL-6） 和人白細胞介素-1β （Interleukin-1β, IL-1β） ELISA 試劑盒（上海紀寧生物科技有限公司），RIPA 裂解液（上?？道噬锟萍加邢薰荆?，蛋白酶/磷酸酶抑制劑、BCA 蛋白濃度檢測試劑盒、SDS-PAGE 凝膠配制試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)股份有限公司），轉(zhuǎn)膜緩沖液（上海萬生昊天生物技術(shù)有限公司），PVDF/NC 膜（上海邁博瑞生物膜技術(shù)有限公司），脫脂奶粉Oxoid? Skim Milk Powder （美國賽默飛世爾科技公司），一抗[C-X-C 基序趨化因子配體12（C-X-C motif chemokine ligand 12, CXCL12）、C-X-C趨化因子受體4 （CXC chemokine receptor 4,CXCR4）、骨保護素（Osteoprotegerin, OPG）、IL-1β]（上海艾博抗貿(mào)易有限公司），HRP 標記二抗（美國賽默飛世爾科技公司，1∶2 000 稀釋），ECL 超敏發(fā)光液（北京百奧萊博科技有限公司）。垂直電泳系統(tǒng)電泳儀（北京六一生物科技有限公司），凝膠成像系統(tǒng)（上海嘉鵬科技有限公司，JP-2880 全自動系統(tǒng)），硬組織切片機（德國Exakt公司，E30OCP型），硬組織磨片機（德國Exakt公司，E400CS型），美國西門子Inveon MM CT 系統(tǒng)，Eppendorf 低溫離心機（德國艾本德股份公司），恒溫孵育搖床（上海智城分析儀器制造有限公司）。 
通過絲線結(jié)扎配合10% 高糖飲食進行誘導。具體操作如下：采用5% 水合氯醛腹腔注射后將其固定于仰臥位。輕輕撐開大鼠的上下切牙，清晰暴露出下頜第一與第二磨牙之間的空間。在確保該空間被適當擴張后，使用0.2 mm 正畸結(jié)扎絲，巧妙地穿過第一磨牙腭側(cè)的遠中鄰間隙，再從頰側(cè)穿出，并將其牢固地安置在齦溝內(nèi)，防止其脫落。飼養(yǎng)過程中，為大鼠提供含10% 高糖水的飲食，并確保每天更換新鮮的食物和水源。為維護結(jié)扎絲的穩(wěn)定性，每3 d 檢查1 次，并在發(fā)現(xiàn)脫落時立即進行重新結(jié)扎。經(jīng)過8 周的結(jié)扎飼養(yǎng)后，對大鼠進行牙周探針檢查。該檢查包括齦溝出血指數(shù)、牙齦指數(shù)、探診深度，每項指標均進行了3 次重復測量，以確保數(shù)據(jù)的準確性。所有測量均由同一名操作員完成，以消除個體差異對結(jié)果的影響。最后根據(jù)牙齦炎癥的嚴重程度及牙槽骨的破壞情況來評估模型復制是否成功。確認模型復制成功后，移除結(jié)扎絲并恢復常規(guī)飲食，采用隨機數(shù)字表法將模型復制成功大鼠分為3 組：牙周炎組（10 只，無額外干預）、Ag-HA涂層組（20 只） 和聯(lián)合組（20 只）。Ag-HA 涂層組和聯(lián)合組大鼠禁食、禁飲12 h 后，肌內(nèi)注射1.5 mL速眠新進行初步麻醉，10 min 后按1 mL/kg 劑量肌內(nèi)注射30 g/L 戊巴比妥鈉進行深度麻醉。麻醉生效后，對大鼠進行消毒并固定，分別植入Ag-HA 涂層種植體或葛根素聯(lián)合Ag-HA 涂層種植體，縫合傷口，并術(shù)后給予頭孢唑啉鈉肌內(nèi)注射預防感染。將高質(zhì)量的HA 粉末與3% Ag 粉充分混合，混合時長2 h，以確保兩種成分均勻分布。利用瑞士Sulzer Metco 真空等離子噴涂技術(shù)，在30 mm×30 mm×2 mm的鈦合金基材上噴涂形成HA 涂層及含有Ag 抗菌劑的Ag-HA 涂層。噴涂參數(shù)： 等離子氣體Ar 流量40 L/min，等離子氣體H2 流量10 L/min，噴涂距離300 mm，涂層目標厚度200 μm，真空室氣壓維持在100 Pa， 送粉載氣Ar 流量2.0 L/min， 送粉速率20 g/min，電流強度650 A，電壓60 V。根據(jù)ASTM C-633 標準檢測，HA 涂層與Ag-HA 涂層的結(jié)合強度分別達到20.1 和23.4 MPa，顯示出優(yōu)異的涂層附著力。Ag-HA 涂層由HA、磷酸三鈣、氧化鈣及Ag＋組成，其中磷酸三鈣和氧化鈣是在HA 噴涂過程中自然分解產(chǎn)生的。為了進一步優(yōu)化涂層的性能，采用電化學沉積技術(shù)， 在特定的電解液條件下（Ag＋濃度0.5 mmol/L，溶液溫度40 ℃，pH 4.0，脈沖電位-2 V，沉積時間2 h），將Ag＋沉積于HA 涂層表面。沉積完成后，樣品在馬弗爐中高溫處理，升溫速率控制在5 ℃/min，以達到所需的熱處理效果。隨后用大量去離子水（5 L） 洗滌沉淀物，并在70 ℃高溫箱中干燥以獲得Ag-HA 顆粒。通過瑪瑙研磨器研磨至所需粒度。 
在Ag-HA 涂層的基礎上，引入葛根素。按照上述Ag-HA 涂層制備方法，在鈦合金基材上形成均勻的Ag-HA 涂層。將葛根素（純度≥90%） 溶解在乙醇中，濃度控制在1～10 mg/mL，具體濃度可根據(jù)所需負載量來調(diào)整。將葛根素溶液噴涂在Ag-HA涂層表面，采用噴霧槍或靜電噴涂方法，確保均勻覆蓋。噴涂時應保持適當?shù)膰娡烤嚯x和速率，以確保涂層均勻，不出現(xiàn)過度堆積。葛根素的濃度控制在1～10 mg/mL，根據(jù)涂層表面生物活性的需求調(diào)整。噴涂可分為2 或3 層進行，每層噴涂后應在室溫下靜置10～15 min，待溶劑揮發(fā)后再進行下一層的噴涂。噴涂完畢后，應將涂層放置在50～60 ℃條件下干燥1 h，以確保溶劑揮發(fā)完畢并固定葛根素。固化溫度為120～150 ℃，持續(xù)30～60 min。選擇大鼠下頜第一磨牙缺失區(qū)作為植入位點（模擬人類后牙區(qū)咬合力需求），該區(qū)域牙槽骨高度充足（≥8 mm），骨質(zhì)致密（皮質(zhì)骨厚度≥1.5 mm），符合骨結(jié)合穩(wěn)定性要求。通過術(shù)前影像學（Micro-CT） 確認植入?yún)^(qū)無殘留牙根或牙槽骨吸收（骨高度≥6 mm），確保為純骨缺損修復模型。定制鈦合金種植體（直徑1.8 mm，長度3.0 mm），表面經(jīng)噴砂酸蝕處理以增強骨結(jié)合。使用種植導板將種植體垂直植入骨缺損區(qū)， 確保頂端位于皮質(zhì)骨下0.5 mm （避免穿破上頜竇或下牙槽神經(jīng)）。通過扭矩控制儀施加15 N·cm 的植入扭矩，達到骨結(jié)合所需機械穩(wěn)定性。種植體完全埋入骨內(nèi)，頸部無暴露，縫合齦瓣覆蓋（使用4-0 可吸收縫線）。術(shù)后肌內(nèi)注射青霉素（8×104 u/kg，連續(xù)3 d） 預防感染。術(shù)后24 h 禁食，逐步恢復飲水及標準飼料。1.8.1 牙周指標 分別于術(shù)前及術(shù)后1、2、4、8 周對3 組大鼠牙周指標進行檢測。①齦溝出血指數(shù)采用6 級分級標準：0 級表示牙齦健康，無炎癥或出血跡象；1 級表示牙齦有輕度炎癥改變，但探診時未見出血；2 級為探診后出現(xiàn)點狀出血；3 級為線狀出血；4 級為出血溢滿并有可能流出齦溝；5 級則表現(xiàn)為牙齦自發(fā)性出血。②牙齦指數(shù)的測量同樣采用4 級分級標準：0 級代表牙齦正常；1 級為輕度炎癥，牙齦顏色略有改變并伴有水腫；2 級為中度炎癥，牙齦呈現(xiàn)紅腫并有出血反應；3 級為重度炎癥，牙齦出現(xiàn)紅腫或潰瘍，且自發(fā)性出血明顯。牙周探診深度的測量涵蓋了頰側(cè)（近中、中央、遠中）和舌側(cè)（近中、中央、遠中）共6 個部位。1.8.2 ELISA檢測炎癥因子水平分別于術(shù)前及術(shù)后1、2、4、8 周抽取大鼠眥靜脈血制備血清，采用ELISA 試劑盒檢測血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平。1.8.3 ALP、骨結(jié)合能力 檢測術(shù)后1、2、4、8 周3 組大鼠血清堿性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP） 水平。選取Ag-HA 組和聯(lián)合組大鼠種植體及緊鄰3 mm 內(nèi)骨組織作為樣本；牙周炎組則選取牙周炎病灶周邊3 mm 內(nèi)的骨組織。采用美國西門子Inveon MM CT 系統(tǒng)掃描樣本。完成掃描后，將種植體周圍1 mm 的區(qū)域設定為感興趣區(qū)域，以便深入探究種植體與骨組織的結(jié)合狀態(tài)。采用德國Exakt公司E30OCP 型硬組織切片機與E400CS 型硬組織磨片機，以及相應的平行黏合壓片裝置，制備厚度為30μm的硬組織切片。每個樣本選取2張切片以備后續(xù)分析。切片制備完畢后，進行亞甲基藍–酸性品紅染色， 以增強樣本結(jié)構(gòu)的可視化效果。利用Image-ProPlus 6.0 圖像處理軟件，對染色后的切片進行圖像分析，通過計算得出種植體與骨組織的結(jié)合率，以此評估種植體的骨結(jié)合效果。
1.8.4 實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative realtimepolymerase chain reaction, qRT-PCR）檢測mRNA表達術(shù)后8 周處死大鼠，收集大鼠牙周組織，使用總RNA 提取試劑盒（北京天根生化科技有限公司，DP419） 提取總RNA。利用FastKing 一步法除基因組cDNA 第一鏈合成預混試劑（北京天根生化科技有限公司，KR118） 獲得cDNA 模板。采用qRT-PCR 檢測IL-1β、OPG、CXCL12、CXCR4 mRNA 相對表達量。反應程序為：95 ℃預變性5 s，升溫速率4.4 ℃/s。PCR 擴增階段共40 個循環(huán)，每循環(huán)包含3 步：95 ℃變性5 s，升溫速率4.4 ℃/s；55 ℃退火30 s，升溫速率2.2 ℃/s；72 ℃延伸30 s，升溫速率2.2 ℃/s。熔解曲線分析階段：95 ℃維持5 min，升溫速率4.4 ℃/s；60 ℃維持1 min，升溫速率2.2 ℃/s； 再升溫至95 ℃ ， 升溫速率0.11 ℃/s。降溫終止階段：50 ℃維持30 s，升溫速率2.2 ℃/s。引物序列信息見表1。使用2-ΔΔCt 法計算mRNA 相對表達量。1.8.5 Western blotting 檢測蛋白表達利用RIPA試劑裂解各組大鼠的牙周組織，提取其中的蛋白質(zhì)。對提取的蛋白質(zhì)進行定量處理，確保在進行Western blotting 檢測時各組樣本的蛋白質(zhì)濃度一致。進行SDS-PAGE 凝膠電泳，將蛋白質(zhì)樣本分離成不同的組分。電泳完成后， 將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，以便進行后續(xù)的抗體孵育。轉(zhuǎn)膜后使用脫脂乳對膜進行封閉，以減少非特異性結(jié)合。4 ℃條件下過夜孵育一抗，一抗包括針對CXCL12、CXR4、OPG、IL-1β 的特異性抗體，所有抗體均以1∶1 000 比例稀釋。一抗孵育完成后，將膜在室溫下孵育二抗，二抗以1∶2 000 比例稀釋，孵育時間為1 h。使用ECL 試劑對膜進行顯色，以便觀察特異性蛋白的結(jié)合情況。利用凝膠成像系統(tǒng)捕捉并保存顯色后的圖像。通過Image J 軟件對圖像中的蛋白灰度值進行分析，從而量化各組大鼠牙周組織中各蛋白相對表達量。1.8.6 骨生物學參數(shù)將已固定的上頜骨樣本使用生理鹽水進行全面沖洗，確保其表面無殘留物，隨后將清洗干凈的樣本妥善放置于專用的掃描容器內(nèi)。設置Micro CT 掃描參數(shù)：電壓70 kV，電流200 mA，曝光時間300 ms，以獲取高質(zhì)量的掃描圖像。完成掃描后，利用專業(yè)軟件進行三維圖像重建。在三維重建的圖像中， 精確記錄以下參數(shù)：組織礦物質(zhì)密度（tissue mineral density, TMD）、骨礦物質(zhì)密度（bone mineral density, BMD）、骨體積分數(shù)（bone volume-to-total volume ratio, BV/TV）、骨小梁厚度（trabecular thickness，Tb.Th）、骨小梁骨分離度（trabecular separation, Tb. Sp）。利用ImageJ 圖像分析軟件進一步測量上頜第一磨牙釉牙骨質(zhì)界（cemento-enamel junction, CEJ） 至牙槽嵴頂（alveolar bone crest, ABC） 的距離（CEJ-ABC）。這一測量有助于了解牙周炎對牙周組織的影響程度。數(shù)據(jù)分析采用SPSS 26.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s） 表示，比較用方差分析或重復測量設計的方差分析，兩兩比較用LSD-t 檢驗。P <0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組術(shù)前及術(shù)后1、2、4、8 周的齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度比較，采用重復測量設計的方差分析，結(jié)果：①不同時間點齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F =4 340.652、7 635.652、762.759， 均P =0.000）； ②牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F =3 277.279、4 101.346、759.460，均P =0.000），聯(lián)合組齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度較低，相對治療效果較好；③3 組齦溝出血指、牙齦指數(shù)、探診深度變化趨勢比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F =676.317、815.183、156.973，均P =0.000）。見表2。牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組術(shù)前及術(shù)后1、2、4、8 周的TNF- α、IL-6、IL-1β 比較，采用重復測量設計的方差分析， 結(jié)果： ①不同時間點TNF-α、IL-6、IL-1β 比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F =9.777、13.909、9.908，均P =0.000）；②牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組TNF-α、IL-6、IL-1β 水平比較， 差異均有統(tǒng)計學意義（F =17.524、6.379、26.361， 均P =0.000）， 聯(lián)合組TNF- α、IL-6、IL-1β水平較低，相對炎癥水平緩解效果較好；③3 組TNF-α、IL-6、IL-1β 水平變化趨勢比較，差異均有統(tǒng)計學意義（ F=3.489、4.116、4.703，P =0.001、0.000、0.000）。見表3。牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組術(shù)后1、2、4、8 周的ALP、骨結(jié)合率比較，采用重復測量設計的方差分析，結(jié)果：①不同時間點ALP、骨結(jié)合率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F =31.312、1 941.408，均P =0.000）； ②牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組ALP、骨結(jié)合率比較，差異均有統(tǒng)計學意義（F =90.924、249.306，均P =0.000），聯(lián)合組ALP、骨結(jié)合能力較高， 相對牙周組織的骨再生能力較強；③3 組骨ALP 變化趨勢比較， 差異無統(tǒng)計學意義（F =2.024，P=0.066）；骨結(jié)合率變化趨勢比較，差異有統(tǒng)計學意義（F =75.438，P=0.000）。見表4。牙周炎組、Ag-HA 組、聯(lián)合組大鼠牙周組織IL-1β、OPG、CXCL12、CXCR4 mRNA 相對表達量比較，經(jīng)方差分析，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05）；聯(lián)合組大鼠牙周組織IL-1β、CXCL12、CXCR4 mRNA 相對表達量均低于Ag-HA 組（P <0.05），OPG mRNA 相對表達量高于Ag-HA 組（P <0.05）。見表5 和圖1。牙周炎組、Ag-HA 組和聯(lián)合組大鼠牙周組織IL-1β、OPG、CXCL12、CXCR4 蛋白相對表達量比較，經(jīng)方差分析，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05）；聯(lián)合組大鼠牙周組織IL-1β、CXCL12、CXCR4 蛋白相對表達量低于Ag-HA 組（P <0.05），OPG 蛋白相對表達量高于Ag-HA 組（P <0.05）。見圖2 和表6。牙周炎組、Ag-HA 組和聯(lián)合組大鼠TMD、BMD、BV/VT、Tb.Th、CEJ-ABC 比較，經(jīng)單因素方差分析，差異均有統(tǒng)計學意義（P <0.05）；聯(lián)合組大鼠TMD、BV/VT、Tb. Th 均高于Ag-HA 組（P <0.05），BMD、CEJ-ABC 均低于Ag-HA 組（P <0.05）。見表7。種植體周圍炎是種植牙術(shù)后影響長期療效的主要并發(fā)癥，以種植體周圍骨進行性吸收和軟組織炎癥為特征，可導致種植體松動甚至脫落，嚴重影響患者口腔功能與生活質(zhì)量[4-6]。牙菌斑生物膜尤其是革蘭陰性厭氧菌如牙齦卟啉單胞菌、具核梭桿菌在種植體表面定植，通過釋放毒素激活宿主免疫反應，引發(fā)炎癥。種植體- 基臺微間隙（0.5～1.5 μm） 形成的“死腔效應”進一步促進致病菌富集，加速骨吸收[7]。細菌刺激導致巨噬細胞極化失衡（M1 促炎型占比>85%），釋放過量促炎因子（如IL-1β、TNF- α），激活破骨細胞并抑制成骨活性。鈦顆粒磨損產(chǎn)物還可激活NLRP3 炎癥小體，加劇局部組織破壞[8]。種植體表面粗糙度過高、粘結(jié)劑殘留、修復體設計不良（如咬合過載）；牙周炎病史（風險增加2.5～5 倍）、糖尿病（糖化血紅蛋白水平與骨吸收正相關(guān)）、吸煙（血管收縮及免疫抑制） [9]。本研究從臨床表現(xiàn)來看，聯(lián)合組大鼠在齦溝出血指數(shù)、牙齦指數(shù)和探診深度上的改善均優(yōu)于牙周炎組和Ag-HA 組。這表明葛根素與Ag-HA 的聯(lián)合應用能夠更有效地減輕種植體周圍炎引起的牙齦炎癥和牙周袋形成，從而改善牙周組織的健康狀況[10]。葛根素具有促進血管生成和細胞增殖的能力，這有助于牙周組織的修復和再生[11]。在種植體周圍炎的治療中，促進牙周組織的修復是恢復其功能的關(guān)鍵[12]。這一結(jié)果與ICONARU 等[13]關(guān)于葛根素和Ag-HA 各自具有抗炎和促進組織修復作用的研究相一致，但聯(lián)合應用的效果更顯著。聯(lián)合組大鼠TNF-α、IL-6 和IL-1β水平均顯著低于牙周炎組和Ag-HA 組。葛根素通過阻斷NLRP3 炎癥小體活化， 顯著抑制Caspase-1 的切割及IL-1β、IL-18 的成熟釋放[14]。實驗結(jié)果顯示，聯(lián)合組IL-1β蛋白表達較Ag-HA 組降低，這與巨噬細胞極化表型轉(zhuǎn)換密切相關(guān)——葛根素促使M1 型促炎巨噬細胞（CD86＋） 向M2 型抗炎/修復型（CD206＋） 轉(zhuǎn)化。同時，葛根素通過抑制NF- κB 核轉(zhuǎn)位，下調(diào)TNF-α、IL-6 等促炎因子轉(zhuǎn)錄，減少中性粒細胞浸潤及基質(zhì)金屬蛋白酶分泌，從而減少結(jié)締組織降解[15-17]。這一發(fā)現(xiàn)進一步支持了葛根素聯(lián)合Ag-HA涂層植入在牙周炎治療中的抗炎作用。在骨生物學參數(shù)方面，聯(lián)合組大鼠的ALP 活性、骨結(jié)合能力及TMD、BV/VT 和Tb.Th 等指標均優(yōu)于牙周炎組和Ag-HA 組。ALP 是成骨細胞分化和骨形成的重要標志物，其活性提高表明聯(lián)合治療能夠促進牙周組織的骨再生[18-20]。同時，骨結(jié)合能力增強也驗證了聯(lián)合治療在促進牙周組織與種植體之間穩(wěn)定結(jié)合方面的優(yōu)勢。此外，TMD、BV/VT 和Tb.Th 等指標提高進一步證明了聯(lián)合治療在改善牙周組織骨結(jié)構(gòu)和提高骨密度方面的效果。低劑量Ag＋（<2 ppm）可刺激成骨細胞增殖， 而HA 提供骨基質(zhì)礦化模板。因此聯(lián)合組BV/TV 和Tb.Th 分別較Ag-HA 組增加，Tb.Sp 降低，證實其可顯著改善骨微結(jié)構(gòu)。雖然聯(lián)合組大鼠BMD 略低于Ag-HA 組，但考慮BMD的變化可能受多種因素的影響，且聯(lián)合組在其他骨生物學參數(shù)上的優(yōu)勢更為顯著，因此可以認為這一差異并不影響聯(lián)合組在牙周炎治療中的整體效果。CEJ-ABC 在聯(lián)合組中較低，這可能反映了聯(lián)合治療在促進牙周組織修復和重建方面的積極作用，使牙周組織更加接近正常狀態(tài)[21-24]。聯(lián)合組大鼠牙周組織中IL-1β表達顯著降低，而OPG 表達顯著提高。同時，CXCL12 和CXCR4 的表達也發(fā)生了變化，這些趨化因子在牙周組織的修復和再生過程中起著重要作用，其表達水平的變化可能反映聯(lián)合治療在促進牙周組織細胞遷移和歸巢方面的效果[25-26]。綜上所述，葛根素聯(lián)合Ag-HA 涂層植入能夠顯著改善種植體周圍炎大鼠的炎癥水平、牙齦指數(shù)、探診深度及骨結(jié)合能力。聯(lián)合治療在抑制炎癥反應、提高骨密度和改善牙周組織修復方面效果更明顯。未來的研究可進一步深入研究葛根素聯(lián)合Ag-HA 涂層植入的機制，并探索其在臨床中的應用價值。
[1] 陸麗娟, 劉曉芬. 慢性牙周炎患者種植體周圍炎預防的研究進展[J]. 臨床口腔醫(yī)學雜志, 2023, 39(1): 58-60.[2] 王瓊, 黃丞一. 赤蘚糖醇噴砂治療牙周病的研究進展[J]. 浙江醫(yī)學, 2024, 46(14): 1554-1559.[3] GOU H Q, CHEN X, ZHU X M, et al. Sequestered SQSTM1/p62 crosstalk with Keap1/NRF2 axis in hPDLCs promotes oxidative stress injury induced by periodontitis[J]. Free Radic Biol Med,2022, 190: 62-74.[4] PAN Y J, LIN T C, SHAO L Q, et al. Lignin/puerarin nanoparticleincorporated hydrogel improves angiogenesis through puerarininduced autophagy activation[J]. Int J Nanomedicine, 2023, 18:5095-5117.[5] ZHANG G Z, JI J W, SUN M Z, et al. Comparative pharmacokinetic profiles of puerarin in rat plasma by UHPLC-MS/MS after oral administration of Pueraria lobata extract and pure puerarin[J]. J Anal Methods Chem, 2020, 2020: 4258156.[6] SINGH H, KRIPLANI P, KAMBOJ S, et al. Puerarin: an anticancer and anti-inflammatory agent[J]. Recent Pat Anticancer Drug Discov, 2024, 19(1): 18-36.[7] SONG X J, WANG W H, DING S S, et al. Exploring the potential antidepressant mechanisms of puerarin: anti-inflammatory response via the gut-brain axis[J]. J Affect Disord, 2022, 310:459-471.[8] HU R B, DENG L Y, HAO X Y, et al. Direct, broad-spectrum antimicrobial activity of Ag+-doped hydroxyapatite against fastidious anaerobic periodontal and aerobic dental bacteria[J].Materials (Basel), 2024, 17(19): 4688.[9] SILVA-HOLGUíN P N, REYES-LóPEZ S Y. Aluminahydroxyapatite- silver spheres with antibacterial activity[J]. Dose Response, 2021, 19(2): 15593258211011337.[10] 萬妮, 莫禮文, 詹樂, 等. 葛根素對實驗性大鼠牙周炎炎癥反應和骨吸收的影響[J]. 海南醫(yī)學院學報, 2023, 29(8): 575-580.[11] 詹樂, 馬瑞堉, 萬妮, 等. 葛根素對牙周炎大鼠Th17/Treg 細胞免疫平衡及相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達的影響[J]. 昆明醫(yī)科大學學報,2022, 43(11): 36-43.[12] WU J Y, HUANG Y X, ZHAN C, et al. Thioredoxin-1 promotes the restoration of alveolar bone in periodontitis with diabetes[J]. iScience, 2023, 26(9): 107618.[13] ICONARU S L, PREDOI D, CIOBANU C S, et al. Development of silver doped hydroxyapatite thin films for biomedical applications[J]. Coatings, 2022, 12(3): 341.[14] WANG J P, WANG X F, LIANG Z W, et al. Injectable antibacterial Ag-HA/ GelMA hydrogel for bone tissue engineering[J]. Front Bioeng Biotechnol, 2023, 11: 1219460.[15] LI J, PENG Y J. Effect of puerarin on osteogenic differentiation of human periodontal ligament stem cells[J]. J Int Med Res,2020, 48(4): 300060519851641.[16] LUO W, SUN L. O-Linked N-Acetylglucosamine transferase regulates bone homeostasis through alkaline phosphatase pathway in diabetic periodontitis[J]. Mol Biotechnol, 2024,66(12): 3475-3484.[17] ZHOU H, QI Y X, ZHU C H, et al. Mesenchymal stem cellderived extracellular vesicles for treatment of bone loss within periodontitis in pre-clinical animal models: a meta-analysis[J]. BMC Oral Health, 2023, 23(1): 701.[18] YAN K X, LIN Q, TANG K L, et al. Substance P participates in periodontitis by upregulating HIF-1α and RANKL/OPG ratio[J].BMC Oral Health, 2020, 20(1): 27.[19] JIANG W T, XU T, SONG Z M, et al. CCL2 is a key regulator and therapeutic target for periodontitis[J]. J Clin Periodontol,2023, 50(12): 1644-1657.[20] JIANG W T, XU T, YUAN S S, et al. Critical roles for CCR2 and the therapeutic potential of cenicriviroc in periodontitis: a pre-clinical study[J]. J Clin Periodontol, 2022, 49(11): 1203-1216.[21] 高巍朕, 張曉鵬, 李文科. 自體軟組織移植輔助前牙即刻種植對唇側(cè)輪廓美學的影響[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志, 2025, 35(4):54-59.[22] LIU X C, DENG S D, LI X Y, et al. A standardized rat model to study peri-implantitis of transmucosal osseointegrated implants[J]. Biomater Res, 2024, 28: 0021.[23] 王培, 蘇小營, 后岷紅. 上頜前牙區(qū)牙槽骨缺損形態(tài)與種植修復術(shù)后植骨吸收率的相關(guān)性及影響移植骨吸收的因素分析[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志, 2023, 33(4): 6-10.[24] WANG X G, CHEN X T, ZHANG Z X, et al. Asperuloside prevents peri-implantitis via suppression of NF-κB and ERK1/2 on rats[J]. Pharmaceuticals (Basel), 2022, 15(8): 1027.[25] CAFFERATA E A, RAMANAUSKAITE A, CUYPERS A, et al. Experimental peri-implantitis induces neuroinflammation: an exploratory study in rats[J]. BMC Oral Health, 2024, 24(1):1238.[26] 黃大海, 王祥蕓, 儲雯, 等. IL-6 對種植體周圍炎大鼠牙齦組織中TNF-α 表達的影響[J]. 河北醫(yī)藥, 2024, 46(15): 2256-2260.
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